水质及生活饮用水中粪大肠菌群的测定多管发酵法解析

     为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水中粪大肠菌群的测定方法，制定本标准。本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的多管发酵法。本标准是对《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T 347-2007）多管发酵法部分的修订。 

   多管发酵法是一种用于检测水样中粪大肠菌群数量的标准化微生物学方法，其核心原理是利用大肠菌群能发酵乳糖产酸产气的特性，通过分阶段培养和观察来实现定性和定量分析。该方法操作流程严谨，是水质监测中的重要手段。

      根据现行国家生态环境标准，‌《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》（HJ 347.2-2018）‌ 是当前适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水的方法，该标准于2019年6月1日起实施，替代了早期的试行标准‌。

      多管发酵法的操作流程主要分为以下三个相互衔接的部分：

‌初发酵试验‌：将不同稀释度的水样接种至乳糖蛋白胨培养液中，在‌37℃±0.5℃‌条件下培养‌24±2小时‌。若培养管出现‌产酸‌（培养液由紫色变为黄色）和‌产气‌（杜氏小管内有气体积聚），则判定为初发酵阳性‌。

‌复发酵试验‌：将初发酵阳性的培养物转移至‌EC培养液‌中，在‌44.5℃±0.5℃‌的恒温水浴中继续培养‌24±2小时‌。若再次产气，则确认为粪大肠菌群阳性，此步骤通过提高温度特异性地筛选出粪便来源的大肠菌群。

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        平板分离与确认‌（可选但常用）：将复发酵阳性的培养物接种于伊红美蓝（EMB）琼脂平板上，于44.5℃培养18–24小时。观察是否形成具有‌深紫黑色金属光泽‌的典型菌落，并通过革兰氏染色和显微镜检查进行最终确认‌。

    该方法通过统计不同稀释度下阳性管的数量，查‌最可能数（MPN）表‌，最终计算出每100mL或每升水样中的粪大肠菌群数量‌‌。

      需注意水利行业标准《水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法》（SL 355-2006）曾长期使用，其操作流程与HJ 347.2-2018基本一致，但当前环境监测领域已统一采用发布的HJ标准‌。

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